细菌基因组DNA 的提取l核酸制备时应注意的事项: ①尽量简化操作步骤，缩短提取过程。 ②减少化学因素对核酸的降解。 ③减少物理因素对核酸的降解：机械剪切力和高温 ④防止核酸的生物降解。 3 、核酸制备的一般原则一、实验原理细菌基因组DNA 的提取核酸制备的步骤：破碎细胞提取纯化I. 材料准备II. 破碎细胞或包膜－内容物释放III. 核酸分离、纯化IV. 沉淀或吸附核酸，并去除杂质 V. 核酸溶解在适量缓冲液或水中细菌基因组DNA 的提取l核酸酶的抑制和抑制剂 降低温度，改变pH 及盐的浓度，都利于对核酸酶活性的抑制，但均不如利用核酸酶抑制剂更有利，当然，几个条件并用更好。 对于DNA ，抑制DNase 活力很容易，但防止机械张力拉断则更重要。 对于RNA ，因分子较小，不易被机械张力拉断，但抑制RNase 活力较难，故在RNA 提取中设法抑制RNase 更重要。4 、核酸制备的一般方法和原理一、实验原理细菌基因组DNA 的提取l核酸酶的抑制和抑制剂 DNase 抑制 ①加入少量金属离子螯合剂，如0.01 mol/L EDTA 或柠檬酸钠，DNase 基本可以全部失活。 ②去垢剂、蛋白变性剂及DNase 抑制剂也可使DNase 失活。细菌基因组DNA 的提取l核酸酶的抑制和抑制剂 RNase 抑制 ①操作要带手套。 ②所有器皿要严格消毒， ③试剂处理 ④低温操作 ⑤在分离过程中要加入一定的RNase 抑制剂。 细菌基因组DNA 的提取l核酸制备中常用的去垢剂 核酸本身带负电荷，结合带正电荷的蛋白质。用于核酸提取的去垢剂，一般都是阴离子去垢剂，去垢剂的作用： 1 ．溶解膜蛋白及脂肪，使细胞膜破裂； 2 ．溶解核糖体上面的蛋白质，使其解聚，将核酸释放出来； 3 ．对RNase 、DNase 有一定的抑制作用。如：SDS 、脱氧胆酸钠、4- 氨基水杨酸钠、萘二磺酸钠、三异丙基萘磺酸钠细菌基因组DNA 的提取l核酸制备中常用的蛋白质变性剂 蛋白质变性剂的作用： 1. 使蛋白质变性、沉淀，从核酸提取液中分离除去，以防造成蛋白污染。 2. 使蛋白质变性，故可使核糖体解聚释放出核酸。 3. 某些蛋白质变性剂也有抑制RNase 活性和破裂细胞的作用。 如：苯酚、氯仿、盐酸胍、DEPC细菌基因组DNA 的提取l核酸制备中常用的酶 DNase RNase 蛋白酶K 溶菌酶 细菌基因组DNA 的提取l核酸提取的一般过程1 ）破碎细胞（防止核酸酶的作用） 微生物：溶菌酶、SDS 裂解。 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。 酶法：蛋白酶，如胰蛋白酶， ...
